詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
產氣腸桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Enterobacter aerogenesPCR | BK-P9112 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
澤瀉醇C-23-醋酸酯;Alisol C CAS 26575-93-9 * 規格: 10mg
紫蘇醛;l-Perillaldehyde CAS 18031-40-8 * 規格: 20mg
原七葉皂苷元;Protoaescigen CAS 20853-07-0 * 規格: 20mg
異甘草苷; Isoliquiritin CAS 5041-81-6 * 規格: 20mg
鳶尾黃素;Tectorigenin CAS 548-77-6 * 規格: 20mg
藥根堿;Jatrorrhizine CAS 6681-15-8 * 規格: 20mg
香荊芥酚;5-Isopropyl-2-m CAS 499-75-2 * 規格: 0.1ml
辛弗林(94-07-5);Synephr CAS * 規格: 20mg
突厥烯;Damascene CAS 23696-85-7 * 規格: 20mg
黃皮素;Kranjin CAS 521-88-0 * 規格: 20mg
桑皮苷C;Mulberroside C CAS 102841-43-0 * 規格: 20mg
射干苷;tectoridin CAS 611-40-5 * 規格: 20mg
20(S)-原人參二醇;Protopan CAS 30636-90-9 * 規格: 20mg
去甲檳榔次堿;Guvacine hydr CAS 498-96-4 * 規格: 20mg
七葉皂苷鈉;Sodium Aescina CAS 20977-05-3 * 規格: 100mg
產氣腸桿菌PCR檢測試劑盒說明書橙皮素 HESPERITIN 302.29分子量:C16H14O6*:520-33-2
萘 Naphthalene 128.17分子量: C10H8*:91-20-3
原花青素 Primary anthocyanin 594.529分子量:C30H26O13*:4852-22-6
洛塞琳 Rosarin 428.43分子量:C20H28O10*:84954-93-8
2,5-二溴-1,4-二甲 263.96 2,5- dibromo -1,4- two methyl benzene*:1074-24-4分子量: C8H8Br2
5-硝異喹啉 174.16 5- nitro group*:607-32-9分子量: C9H6N2O2
一水合硫酸錳 169.02 Hydrated manganese sulfate*:10034-96-5分子量: MnSO4.H2O
磺酸鈷 251.1 Cobalt amino sulfonic acid*:14017-41-5分子量: CoH4N2O6S2
考馬斯亮藍G250 Kaumas blue G250 854.02分子量: C47H48N3NaO7S2*:6104-58-1
4-乙炔甲 116.16 4- acetylene*:766-97-2分子量: C9H8; CH3C6H4C≡CH
2,2,2,3',4'-五氟乙 210.1 2,2,2,3', 4'- five benzene fussol*:302912-28-3分子量: C8H3F5O
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