詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
內阿米巴通用PCR檢測試劑盒價格 | Entamoeba spp. PCR | BK-P9106 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
啶脲;純品型;標準品;有證書 CAS 71422-67-8 * 規格: 0.1g
楊酸-對照品;有報告 CAS 69-72-7 * 規格: 100mg
低聚果糖-蔗果三糖;純品型;標準品;有證 CAS 470-69-9 * 規格: 20mg
2;6-二叔丁基對;純品型;標準品- CAS 128-37-0 * 規格: 0.25g
去乙酰華蟾精 CAS 4026-95-3 * 規格: HPLC≥95%;10mg
苯甲酰氧化芍藥苷 CAS 72896-40-3 * 規格: HPLC≥98%;20mg
槲皮素-3-龍膽二糖甙 CAS 7431-83-6 * 規格: HPLC≥98%;20mg
依洛康 CAS 220998-10-7 * 規格: HPLC≥98%;20mg
新魯斯可皂苷元 CAS 17676-33-4 * 規格: HPLC≥98%;20mg
紫菫定酚 CAS 476-69-7 * 規格: HPLC≥95%;10mg
硬脂酸甲酯 CAS 112-61-8 * 規格: HPLC≥98%;50mg
異去甲蟛蜞菊內酯 CAS 6468-55-9 * 規格: HPLC≥98%;5mg
檀香醇 CAS 11031-45-1 * 規格: HPLC≥98%;20mg
蘇丹紅Ⅲ CAS 85-86-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
5-羥基-7,8-二甲氧基黃 CAS 3570-62-5 * 規格: HPLC≥98%;10mg
內阿米巴通用PCR檢測試劑盒價格kasumi-1, 人白血病細胞株雙孢蘑菇 Agaricus bisporus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae胰蛋白酶-EDTA(含10mL 酶解緩沖液)
二色小單孢菌 Micromonospora bicolor小鼠骨髓基質細胞*培養基
非洲爪蟾胚胎細胞植物桿菌 Lactobacillus plantarum
熱帶假絲酵母 Candida tropicalis費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
冬蟲夏草 Cordyceps sinensisMPC-11(小鼠漿細胞瘤)
小鼠小梁網細胞*培養基少根根霉 Rhizopus arrhizus
人主動脈平滑肌細胞*培養基光帽鱗傘 Pholiota nameko
葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人咽鱗細胞
保加利亞桿菌 Lactobacillus bulgaricus人臍動脈平滑肌細胞
B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)異常漢遜酵母 Hansenula anomala
酒假絲酵母 Candida kefyr大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarumCOLO 205(人結腸細胞)
MDBK(牛腎細胞)皺褶假絲酵母 Candida rugosa
東方伊薩酵母 Issatchenkia orientalis黃質產色鏈霉菌 Streptomyces xanthochromogenes
產黃青霉 Penicillium chrysogenumEBTr (NBL-4) (牛胚氣管細胞)
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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