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注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法
產品規格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產品貨號:BK-01S6336
產品分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:
測定意義 測定意義: CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環第一個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。 測定原理 CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2 ug pKH3 pKH3 低溫運輸,-20℃保存
沙氏瓊脂培養基 Sabouraud’s Agar 250g
1瓶 MDA-MB-231細胞株 MDA-MB-231 低溫運輸和保存
EC肉湯 E.Coli Broth 250g
100U 尿酸 Uricase -20℃保存
500mL TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) 常溫保存
20次 一站式GST標記蛋白質微量純化套裝(超聲破碎細胞) One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack 介質需4℃保存,、Benzonase和PMSF需-20℃保存
2 ug pSUPERIOR.puro pSUPERIOR.puro 低溫運輸,-20℃保存
5次 Southern級動物DNAout Southern Grade Animal DNAOUT 4℃保存,蛋白K需要低溫運輸,-20℃保存
2 ug pCold TF pCold TF 低溫運輸,-20℃保存
NAC液體培養基 NAC Solid Medium 250g
檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2 細胞粘附分子2 規格: 0.2ml
Phospho-MSK1 (Ser376) 磷酸化有絲分裂原和應激活化型蛋白激1抗體 規格: 0.1ml
KLHL32 Kelch樣蛋白32抗體 規格: 0.2ml
P45017A1/Cytochrome P450 17A1 P450 17A1抗體 規格: 0.1ml
CEP76 中心體蛋白質76抗體 規格: 0.2ml
EGF 表皮生因子抗體 0.1ml
CD172a/SIRP Alpha 信號調節蛋白α抗體 規格: 0.2ml
PFKFB1 果糖-2,6-二磷酸1抗體 規格: 0.2ml
phospho-IKKi/IKKe(Ser172) 磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激i抗體 規格: 0.1ml
phospho-CASC3(Tyr181) 磷酸化瘤易候選基因3抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Bad(Ser136) 磷酸化相關死亡促進因子抗體 規格: 0.1ml
VASP 管擴張刺激磷蛋白抗體 規格: 0.1ml
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