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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒紫外分光光度法
產品規格:50管/48樣
檢測方法:紫外分光光度法
產品貨號:BK-01S6368
產品分類:輔酶Ⅱ系列
商品介紹:
測定意義: SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有的美白效果,在化妝品工業中具有重要應用。 測定原理: SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率,即可計算SP活性。 自備實驗用品及儀器: 天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計/酶標儀、1mL石英比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
1瓶 PA317細胞株 PA317 低溫運輸和保存
兔血漿 Rabbit plasma 0.5ml*10
50g 酪蛋白 Casein From Bovine Milk 室溫干燥保存
500mL Wash Buffer Wash Buffer 常溫保存
100U 二酯Ⅰ Phosphodiesterase I -20℃保存
2 ug pUSE (Amp) pUSE (Amp) 低溫運輸,-20℃保存
50次 柱式海洋動物DNAout Column Marine Animal DNAOUT 常溫
2 ug p3×FLAG-CMV-8 p3×FLAG-CMV-8 低溫運輸,-20℃保存
乳酸桿菌選擇性培養基 LBS Agar 250g
25g 1:250 Trypsin 1:250 Porcine Pancreas 4℃保存
50T 豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒紫外分光光度法Integrin beta 6 整合素β6抗體(Integrin β6) 0.2mlAdenylate Kinase 1/AK1 苷酸激-1抗體 規格: 0.2ml
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶體相關膜蛋白3抗體 規格: 0.1mlPhospho-HER3(Tyr1328) 磷酸化HER3受體抗體 規格: 0.1ml
Exendin 4 GLP1類似蛋白Exendin4抗體 規格: 0.1mlphospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體 規格: 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標記的羊抗牛IgG 規格: 0.1mlCR1/CD35 Ⅰ型補體受體抗體(C3b/C4b受體抗體) 規格: 0.1ml
KLHL36/C16orf44 Kelch樣蛋白36抗體 規格: 0.2mlCASC5 瘤易性候選基因5抗體 規格: 0.2ml
GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體 規格: 0.1mlTIMP-2 金屬蛋白組織抑制因子-2抗體 規格: 0.1ml
phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體 規格: 0.1mlDC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 規格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.1mlPLGLB2 纖溶相關蛋白B2抗體 規格: 0.2ml
Cdc7 細胞分裂周期蛋白7抗體 規格: 0.1mlAKT3 蛋白激B3 規格: 0.1ml
HSPBAP1 熱休克蛋白27相關蛋白1抗體 規格: 0.2mlGRM2/GLUR2 促代謝型谷受體2抗體 規格: 0.1ml
TTC23 宮頸原基因8抗體 規格: 0.2mlCytokeratin 13/CK-HMW 高分子量細胞角蛋白抗體 規格: 0.1ml
RIT1 RIT1蛋白抗體 規格: 0.2mlTPSB2 肥大細胞類胰蛋白β2 規格: 0.1ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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