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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:游離脂肪酸含量(FFA)測試盒可見分光光度法
產品規格:50管/48樣
檢測方法:可見分光光度法
產品貨號:BK-01S6638
產品分類:脂肪酸代謝系列
商品介紹:
測定意義: 游離脂肪酸,也稱為非酯化脂肪酸,在與白蛋白結合的血漿中循環。動物血液中的游離脂肪酸 (FFA )含量是一項重要的生理生化指標。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌功能有關,游離脂肪酸的濃度會因為糖尿病、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進等疾病而上升。測定原理: 用有機溶劑萃取FFA。含有FFA的有機液與三乙醇胺銅反應,在有機相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA一Cu。Cu離子與顯色液反應形成紫紅色絡合物。反應形成的顏色深淺與Cu離子濃度的關系符合朗伯一比爾定律,因此可利用此反應進行比色。 自備的儀器和用品: 可見分光光度計、離心機、可調式移液器、玻璃比色皿、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
25g L- 天門冬 L-Aspartic Acid 室溫保存
25mL Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X 常溫保存
10g 考馬斯亮藍G-250 Coomassie Blue G-250 常溫保存
2 ug pTrcHis C pTrcHis C 低溫運輸,-20℃保存
50次 磁珠動物DNAout MAG Animal DNAOUT 磁珠4℃保存,蛋白K溶液-20℃保存(勿反復凍融)
2 ug pEGM-11ZF(+) pEGM-11ZF(+) 低溫運輸,-20℃保存
小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗培養基
1g 亞精胺 ( 精脒 ) 4℃保存
50T 魚特定基因序列PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
100mL 淋巴細胞分離液A型(人) Lymphocyte Separation Solution A 4℃保存
250mL HEPES Lysis Buffer with NP-40 HEPES Lysis Buffer with NP-40 常溫保存
游離脂肪酸含量(FFA)測試盒可見分光光度法Phospho-RCC1 (Ser11) 磷酸化染色體濃調控蛋白1抗體 規格: 0.1ml
CLEC1/CLEC1A C型凝集素結構域家族1成員A抗體 規格: 0.2ml
GDF8 生分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗馬IgM 規格: 0.1ml
P311 protein 神經再生相關蛋白抗體 規格: 0.1ml
FRS2 成纖維細胞生因子受體底物2抗體 規格: 0.2ml
APOA5 載脂蛋白A5抗體 規格: 0.2ml
IL-21 白介素21抗體 規格: 0.2ml
BST1/CD157 骨髓基質干細胞抗原1抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗小鼠IgM 規格: 0.3ml
SNX25 分揀微管連接蛋白抗體 規格: 0.2ml
XIAP/BIRC4 X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗體 規格: 0.1ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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