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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法
產品規格:50管/48樣
檢測方法:可見分光光度法
產品貨號:BK-01S6844
產品分類:土壤系列
商品介紹:
測定意義: 土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標。 測定原理: 氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在細胞呼吸過程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現紅色,在波長485nm處有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。 自備實驗儀器及用品: 篩子、天平、恒溫培養箱或水浴鍋、低溫離心機、漏斗,濾紙、可見分光光度計、玻璃比色可見分光光度計/酶標儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請用戶自備)。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
抗生素5號 Antibiotic NO.5 250g
1瓶 D341 Med細胞株 D341 Med 低溫運輸和保存
含TSA平板(7cm) Tryptose Soya Agar 10個/包
10U ATP硫酸化 ATP Sulfurylase -20℃保存
500mL PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0 PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0 常溫保存
1g 氨芐干粉 Ampicillin Powder 4℃保存
2 ug pPink LC pPink LC 低溫運輸,-20℃保存
葡萄糖發酵管 20支
2 ug pMSCV-puro pMSCV-puro 低溫運輸,-20℃保存
mCPC mCPC Medium 250g
25g L- 鹽酸鹽 L-Histidine HCl 室溫干燥保存
土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法EMP3 上皮細胞膜蛋白3抗體 規格: 0.2mlELL2 聚合延伸因子2抗體 規格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標記的驢抗豚鼠IgG 規格: 0.1mlPhospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關死亡促進因子抗體 規格: 0.1ml
phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規格: 0.1mlbeta 2 Microglobulin β2微球蛋白抗體 規格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3 Cy3標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體 規格: 0.1ml
CK15 細胞角蛋白15抗體 規格: 0.1mlCYP24A1 細胞色素P450 24A1抗體 規格: 0.2ml
Mast Cell Tryptase 肥大細胞蛋白7抗體 規格: 0.1mlFactor VII light chain 凝因子VII 規格: 0.2ml
RABGAP1 Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體 規格: 0.2mlCOX7A2 氧化VIIA亞型2抗體 0.1ml
Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185) 磷酸化胰島素受體β抗體 規格: 0.1mlCollagen VII 7型膠原抗體 規格: 0.1ml
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內皮細胞受體蛋白酪激A3+A4+A5抗體 規格: 0.1ml
SPARCL1/Ecm2 細胞外基質蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Phospho-NMDAR1(Ser897) 磷酸化谷受體1抗體 規格: 0.1ml
FDC-SP/ADC 濾泡樹突細胞分泌蛋白抗體 規格: 0.1ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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