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注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒微量法
產品規格:100管/48樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S7018
產品分類:光合作用系列
商品介紹:
測定意義: 多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一種細胞壁結合蛋白,可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,參與果膠的降解,使細胞壁結構解體,導致果實軟化,與果實成熟、葉和花的脫落、病原物防御,細胞伸展發育以及木質化有關,在植物抗病性和食品貯藏保鮮領域具有較高的研究價值。 測定原理: 多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸,具有還原性醛基,與DNS試劑反應生成紅棕色物質,在540nm有特征吸收峰,測定540nm處吸光值變化可計算得多聚半乳糖醛酸酶活性。 自備實驗用品及儀器: 天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
5g 1- 萘胺 1-Naphthylamine -20℃保存
50T 氣單胞菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
250 μg Fluo-3 AM(鈣離子熒光探針) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
25mL Bovine Gamma Globulin Solution,1mg/mL Bovine Gamma Globulin Solution,1mg/mL 常溫保存
50次 柱式DNA膠回收試劑盒 Column DNABACK 常溫保存
2 ug PGL2-enhancer PGL2-enhancer 低溫運輸,-20℃保存
9號 250g
1瓶 Hela-GFP細胞株 Hela-GFP 低溫運輸和保存
改良鹽緩沖液(PSB) Phosphate Buffered Saline 10ml*20支/包
50U Cre 重組 Cre Recombinase -20℃保存
250mL Sodium Phosphate Buffer(鈉緩沖液),0.5M,pH7.6 Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.6 常溫保存
多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒微量法ENaCg/γENaC 上皮鈉離子通道蛋白γ抗體 規格: 0.2mlLFABP/FABP-1 肝臟型脂肪酸結合蛋白抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規格: 0.1mlAMFR/Gp78/RNF45 環指蛋白45/自分泌運動因子受體抗體 規格: 0.2ml
ATGL 脂肪甘油三酯脂抗體 規格: 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/PE PE標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.1ml
CRLF2 胸基質淋巴細胞生成素受體抗體 規格: 0.2mlCathepsin S 組織蛋白S抗體 規格: 0.2ml
FMRP/FMR1 脆性X智力低下蛋白抗體 規格: 0.2mlMCP1/CCL2 單核細胞趨化蛋白1抗體 規格: 0.1ml
phospho-HDAC8(Ser39) 磷酸化組蛋白去乙酰化8抗體 規格: 0.1mlDAP-5/p97 死亡相關蛋白5抗體 規格: 0.1ml
Cyclin E2 周期素E2抗體 規格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG F(ab')2/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗人IgG F(ab')2 規格: 0.1ml
SARS putative orflab polyprotein 抗體 規格: 0.2mlTIP30 TIP30蛋白抗體 規格: 0.2ml
phospho-IKK gamma (Ser85) 磷酸化KB抑制蛋白激γ抗體 規格: 0.1mlNCKAP1 膜相關的蛋白質HEM2抗體 規格: 0.2ml
BMP5 骨形態發生蛋白5抗體 規格: 0.1mlATH III 抗凝3抗體 規格: 0.2ml
APC5 細胞分裂周期蛋白5抗體 規格: 0.2mlFAM98B FAM98B蛋白抗體 規格: 0.2ml
Endothelial lipase 內皮脂肪抗體 規格: 0.2mlSAMD7 SAMD7蛋白抗體 規格: 0.2ml
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