詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
沙氏住白細胞原蟲PCR檢測試劑盒說明書 | Leucocytozoon sabrezisPCR | BK-P9348 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
小鼠補體片斷3b(C3b)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠補體片斷3a(C3a)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠補體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠補體蛋白4(C4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠補體蛋白3(C3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠補體1抑制物抗體(C1INH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠丙二醛(MDA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠吡啶交聯物(PY)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
沙氏住白細胞原蟲PCR檢測試劑盒說明書T淋巴細胞識別的鱗狀細胞癌SART3抗體 規格: 0.2ml 英文名稱:SART3
乳酸細菌表面蛋白抗體 規格: 0.2ml 英文名稱:surface layer protein
雙鏈RNA結合蛋白Staufen抗體 規格: 0.2ml 英文名稱:Staufen
轉錄調控激活蛋白SNF5抗體 規格: 0.1ml 英文名稱:SNF5
驢抗羊IgG 1mgDonkey Anti-Goat IgG
PE-Cy7標記的小鼠抗牛IgG 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/PE-Cy7
FITC標記的小鼠抗羊IgG 0.3mlMouse Anti-Goat IgG/FITC
PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠k鏈 0.1mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy5.5
Cy5標記的兔抗馬IgM 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/Cy5
Alexa Fluor 647標記的羊抗豚鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 350標記的小鼠抗人IgG 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 350
Cy5標記的小鼠抗大鼠IgG 0.1mlMouse Anti-rat IgG/Cy5
Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素 0.1mlRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 488
生物素標記的兔抗雞IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/Bio
生物素標記的兔抗羊IgM 0.5mlRabbit Anti-Goat IgM/Bio
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