詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒廠家 | Fusarium solaniPCR | BK-P9193 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
冬凌草乙素 CAS 52617-37-5 * 規格: 10mg
大黃酚 CAS 481-74-3 * 規格: 20mg
鳶尾黃素 CAS 548-77-6 * 規格: 20mg
苦杏仁苷 CAS 29883-15-6 * 規格: 20mg
蝙蝠葛堿 CAS 524-17-4 * 規格: 20mg
表告依春 CAS 1072-93-1 * 規格: 20mg
阿馬堿 CAS 483-04-5 * 規格: 20mg
雷公藤內酯甲 CAS 84104-71-2 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
薯蕷皂甙 CAS 19057-60-4 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
重樓皂苷 II CAS 76296-72-5 * 規格: HPLC≥98%;20mg/vial
松果菊苷 CAS 82854-37-3 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
黃豆黃素 CAS 40957-83-3 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
人參皂苷 Rf CAS 52286-58-5 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
歐前胡素 CAS 482-44-0 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
橙皮素 CAS 520-33-2 * 規格: HPLC≥98%,20mg/vial
茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒廠家尼氏(Nissl)染色液SK-N-SH, 人神經母細胞瘤細胞
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
NCI-H1703(人肺鱗細胞)CHO(倉鼠卵巢細胞)
米根霉 Rhizopus oryzae豬霍亂沙門氏菌孔成道夫變種 Salmonella cholerae-suis var. kunzendorf
煙曲霉 Aspergillus fumigatus金色鏈霉菌 Streptomyces aureus
大鼠血管外膜成纖維細胞*培養基Du145全細胞裂解液
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae黑曲霉 Aspergillus niger
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae抗生鏈霉菌 Streptomyces antibioticus
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vignaWTRL1(大鼠肺細胞)
MDA-MB-468(人腺細胞)運動發酵單胞菌 Zymomonas mobilis
植物桿菌 Lactobacillus plantarum美味側耳 Pleurotus sapidus
酸鏈球菌 Streptococcus lactis胎兒表皮角化細胞*培養基
大鼠肝細胞NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系
青春雙歧桿菌 Bifidobacterium adolensentis洋蔥伯克霍爾德氏菌 Burkholderia cepacia
黑曲霉 Aspergillus niger大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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