詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
禽腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書 | Fowl Adenovirus(FAdV)PCR | BK-P9180 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
異土木香內酯 CAS 470-17-7 * 規格: 20mg
川芎對照藥材 CAS * 規格: 1g
穿山龍 CAS * 規格: 5g
朝藿定B CAS 110623-73-9 * 規格: 20mg
酸軟骨素鈉 CAS * 規格: 250mg
榿木 CAS * 規格: 20mg
甲胎蛋白(AFP) CAS * 規格: 3支/套 免疫測定用
山綠茶 CAS * 規格: 5g
枸櫞酸舒芬太 CAS * 規格: 20mg
比妥 CAS * 規格: 100mg
白土苓(華南肖菝葜) CAS * 規格: 10g
卷柏(卷柏) CAS * 規格: 2g
CAS * 規格: 1ml
黑豆 CAS * 規格: 5g
銀杏內酯C(暫行) CAS * 規格: 20mg
禽腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書亞硫酸氫鉀 120.17 Sodium bisulfite*:2145137分子量: KHSO3
雙(三膦)硼氫亞銅 602.97 雙(三膦)硼氫亞銅*:16903-61-0分子量: C36H34BCuP2
丙砜 182.24 Vinyl benzene*:16212-05-8分子量: C9H10O2S
亮藍 Blue 792.85分子量: C37H34N2Na2O9S3*:3844-45-9
隱色結晶紫 Color crystal violet 373.53分子量: C25H31N3*:603-48-5
活性嫩黃KE-3G Active yellow ke-3g 分子量: C52H34Cl2N18O20S6.6Na*:59112-78-6
三十 Thirty acid 452.8分子量: C30H60O2*:506-50-3
異丙甲砜 122.19 Methyl group*:4853-74-1分子量: C4H10O2S
1-丁-2,3-二甲三氟磺酸咪唑 302.31 1- two methyl methyl three*:765910-73-4分子量: C10H17F3N2O3S
2-芐吡 169.22 2- benzyl pyridine*:101-82-6分子量: C12H11N
4-溴戊 227.14 4- bromo amylbenzene*:51554-95-1分子量: C11H15Br
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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