詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬鼻炎病毒PCR檢測試劑盒規格 | Equine Rhinitis VirusPCR | BK-P9143 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
MN-h, 小鼠海馬神經元阿舒假囊酵母 Crebrothecium ashbyii
色素瘤關聯硫酸軟骨素蛋白聚糖(MCSP)重組蛋白英文名稱:Recombinant Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan (MCSP)
賴氨酸脫羧酶培養基/Lysine Decarboxylase Medium用于細菌賴氨酸脫羧酶試驗5克國產/進口
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae三寶壟霉 Rhizopus semaranzensis
曲霉 Aspergillus niger特異青霉(點青霉) Penicillium notatum
PBS人宮頸細胞
Sf-21(昆蟲細胞)5×106cells/瓶×2
大鼠視網膜微血管內皮細胞*培養基100mL
緩沖蛋白胨水/緩沖蛋白胨水增菌/BPW沙門氏菌前增菌培養和李氏菌前增菌培養250克國產/進口
放線菌肉湯培養基/Actinomycete Broth Medium250克國產/進口
抗生素Ⅷ號培養基/抗生素8號培養基/Antibiotic Agar NO.8去甲萬古霉素的效價測定250克國產/進口
馬鼻炎病毒PCR檢測試劑盒規格腫瘤壞死因子配體超家族成員4(TNFSF4)重組蛋白 Recombinant Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 4 (TNFSF4)
MDA-MB-453(人腺細胞)5×106cells/瓶×2
EB-3(人Burkitt淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2
人胰腺細胞 CFPAC-1
大鼠正常肝細胞 BRL-3A
人膀胱阿霉素耐藥株 BIU-87/Adr
水平板計數瓊脂培養基/Water Plate Count Agar飼料中細菌總數測定250克國產/進口
抗生素Ⅳ號培養基/抗生素4號培養基/Antibiotic Agar NO.4兩性霉素B等藥品的效價測定250克國產/進口
TTC營養瓊脂/三苯四唑營養瓊脂/三苯四氮營養瓊脂/紅四氮唑營養瓊脂/三苯基四氮唑營養瓊脂/TCC Nutrient Agar用于細菌總數測定時防止菌落蔓延250克國產/進口
3.5% NaC1鳥氨酸脫羧酶發酵管BR20支國產/進口
大鼠肺微血管內皮細胞*培養基100mL
小鼠腎實質細胞*培養基100mL
改良的Mc Bride瓊脂MMA 規格: 250g 用途: 用于單核細胞增生李斯特氏菌的選擇性分離培養(GB/T4789.30-2003,SN0184-93)。
改良CCD瓊脂配套試劑 規格: 10支/盒 用途: 每支添加于100ml(022212)中配成MLST
白介素17(IL17)重組蛋白 Recombinant Interleukin 17 (IL17)
骨成型蛋白4(BMP4)重組蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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