詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腸道病毒通用PCR檢測試劑盒廠家 | Enterovirus(EV)RTPCR | BK-P9129 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
田菁瘤菌 Azorhizobium canlinodans瘤菌 Rhizobium sp.
干擾素α(IFNα)重組蛋白英文名稱:Recombinant Interferon Alpha (IFNa)
人肺大動脈平滑肌細胞*培養基100mL
HGC-27人胃細胞
臭曲霉 Aspergillus foetidus人臍靜脈內皮細胞*培養基
中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii黃曲霉 Aspergillus flavus
優級胎牛血清/Fetal bovine serum(Characterized FBS)BR100/500毫升國產/進口
無花果曲霉 Aspergillus ficuumM1(小鼠白血病細胞)
免疫球蛋白G1(IgG1)天然蛋白 英文名稱:Native Immunoglobulin G1 (IgG1)
哥倫比亞血瓊脂基礎/Columbia Blood Agar Base各種細菌的基礎培養基250克國產/進口
凝結芽孢桿菌 Bacillus coagulans
腸道病毒通用PCR檢測試劑盒廠家NCI-H460(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
N-myc下游調節基因2(NDRG2)重組蛋白 Recombinant N-myc Downstream Regulated Gene 2 (NDRG2)
多巴胺受體D3(DRD3)重組蛋白 Recombinant Dopamine Receptor D3 (DRD3)
解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)重組蛋白 Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 10 (ADAM10)
特異性蛋白1(Sp1)重組蛋白 Recombinant Specificity Protein 1 (Sp1)
組織金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)重組蛋白 Recombinant Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 3 (TIMP3)
OP9(小鼠骨髓基質細胞)5×106cells/瓶×2
HLF-a(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
人肺腺細胞 H1299
貓腎細胞 F81
亞利桑那菌瓊脂/SA瓊脂/Salmonella Arizona Agar亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離250克國產/進口
錳營養瓊脂培養基/Manganese Nutrient Agar Medium250克國產/進口
膽硫瓊脂/膽鹽硫瓊脂培養基/DHL瓊脂/DHL Agar沙門氏菌和志賀氏菌的分離培養250克國產/進口
Hanks’平衡鹽/Hanks’ Balanced Salt solution細胞培養級500毫升國產/進口
人腎動脈平滑肌細胞*培養基100mL
大鼠小梁網細胞*培養基100mL
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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