詳細介紹
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
同艾特韋病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Egtved Virus(VHSV)RTPCR | BK-P9093 |
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
白及 CAS * 規格: 1g
三苯甲醇(齊多夫定雜質) CAS * 規格: 50mg
狼乙素 CAS * 規格: 20mg/支
巴豆苷 CAS * 規格: 20mg
蓖油酸 CAS * 規格: 0.1ml
苑子苷A CAS * 規格: 約20mg/支
2,6-二酚 CAS * 規格: 50mg
馬來酸曲美布汀 CAS * 規格: 100mg
一點紅 CAS * 規格: 3g
藁本 CAS * 規格: 1g
二倍他米松 CAS * 規格: 100mg
美司坦 CAS * 規格: 100mg
去氫二異丁香酚 CAS * 規格: 約20mg/支
萘甲唑啉 CAS 550-99-2 * 規格: 100mg
木香揮發油 CAS * 規格: 0.1ml
同艾特韋病毒PCR檢測試劑盒廠家鄰溴四唑 225.05 Ortho four*:73096-42-1分子量: C7H5BrN4
4-羥-4- 177.24 4- hydroxy -4- phenyl Piperidines*:40807-61-2分子量: C11H15NO
TTC TTC 334.8分子量: C19H15ClN4*:
4--6-氯嘧 129.55 4- amino -6-*:5305-59-9分子量: C4H4ClN3
2,4,6-三氟三氟甲 200.08 2,4,6- three f three f*:122030-04-0分子量: C7H2F6
9-咔唑 243.31 9- phenyl carbazole*:1150-62-5分子量: C18H13N
5--2-甲吡 118.14 5- cyano -2- methyl pyridine*:3222-48-8分子量: C7H6N2
蟲螨磷亞砜 377.24 P and P*:29185-21-5分子量: C11H15Cl2O4PS2
圣草次苷 Time of St 596.53398分子量:C27H32O15*:13463-28-0
石吊蘭素 Nevadensin 344.32分子量:C18H16O7*:152743-19-6
番瀉葉苷 Sennoside 862.74分子量:C42H38O20*:
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