詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腦胞內原蟲屬通用·PCR檢測試劑盒規格 | Encephalitozoon spp.·PCR | BK-P9103 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
人腹膜毛細血管內皮細胞*培養基人胚肺成纖維樣細胞(男)
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii
大鼠神經小膠質細胞*培養基100mL
胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎/Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗250克國產/進口
霍亂雙糖鐵瓊脂/KIA/Kligler Iron Agar用于霍亂、副溶弧菌的分離培養250克國產/進口
Super-Bradford蛋白定量試劑盒200ml國產
猴胚胎腎上細胞英文名稱:Marc145
木耳 Auricularia auriculaHep-2, 人喉細胞系
NCI-H716(人結直腸腺細胞)植物桿菌 Lactobacillus plantarum
大鼠腸平滑肌細胞*培養基100mL
髓細胞觸發受體1(TREM1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Triggering Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (TREM1)
腦胞內原蟲屬通用·PCR檢測試劑盒規格植物桿菌 Lactobacillus plantarum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti盾形木耳 Auricularia peltata
OK(負鼠腎小管細胞)小鼠腎小管平滑肌細胞*培養基
嗜松青霉 Penicillium pinophilum皺狀假絲酵母 Candida versatilis
大豆慢生根瘤菌HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內皮細胞)
人結直腸腺細胞粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae香菇 Lentinula edodes
固囊酵母 Trichoderma longibrachiatum人內膜腺細胞
蘇云金芽胞桿菌巴基斯坦亞種 Bacillus thuringiensis subsp. pakistani人胎盤滋養層細胞*培養基
小鼠氣管平滑肌細胞*培養基康寧木霉 Trichoderma koningii
香菇 Lentinula edodes枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
香菇 Lentinula edodesH4(人腦神經膠質瘤細胞)
30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(29:1)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
藤倉赤霉 Gibberella fujikuroi爪哇根霉
苜蓿中華根瘤菌人腎透細胞皮膚轉移細胞
rCSC, 大鼠心肌細胞U-2 OS, 人骨瘤細胞
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