詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
封閉毛細線蟲PCR檢測試劑盒廠家 | Capillaria obsignataPCR | BK-P8965 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
1,3-O-二啡酸酰奎寧酸 CAS * 規格: HPLC≥98%;20mg
23-羥基白樺酸 CAS 85999-40-2 * 規格: HPLC≥98%;20mg
葒草素-2"-0-B-L半乳糖苷 CAS 861691-37-4 * 規格: HPLC≥98%;20mg
木蘭脂素 CAS 6859-66-1 * 規格: HPLC≥98%;20mg
對羥基苯 CAS 99-96-7 * 規格: HPLC≥99%;100mg
L-鼠李糖 CAS 10030-85-0 * 規格: HPLC≥98%;100mg
γ-氨基 CAS CAS:56-12-2 * 規格: HPLC≥99%;100mg
林澤蘭內酯C CAS * 規格: HPLC≥98%;5mg
路路通內酯 CAS 185051-75-6 * 規格: HPLC≥98%;20mg
漢黃芩苷 CAS 51059-44-0 * 規格: HPLC≥98%;20mg
苯甲酰芍藥苷 CAS 38642-49-8 * 規格: HPLC≥98%;20mg
葫蘆素B CAS 6199-67-3 * 規格: HPLC≥95%;20mg
草質素苷 CAS 85571-15-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
L-4-羥基異亮氨酸 CAS 6001-78-8 * 規格: HPLC≥98%;20mg
牡荊素鼠李糖苷 CAS 64820-99-1 * 規格: HPLC≥98%;20mg
封閉毛細線蟲PCR檢測試劑盒廠家大鼠肺血管平滑肌細胞*培養基100mL
腫瘤壞死因子β(TNFβ)重組蛋白 Recombinant Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb)
MDA-MB-453(人腺細胞)鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
HCT-8(人盲腸腺細胞)5×106cells/瓶×2
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosusRN-s, 大鼠紋狀體神經元
蠟樣芽孢桿菌顯色培養基 規格: 1000ml 用途: 用于食品樣本中蠟樣芽孢桿菌的快速分離和鑒定。
M1(小鼠白血病細胞)大鼠胰腺導管上皮細胞*培養基
無花果曲霉 Aspergillus ficuumM1(小鼠白血病細胞)
厚垣孢普可尼亞菌 Pochonia chlamydosporia
酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
庖肉培養基基礎 規格: 250g 用途: 用于厭氧菌的增菌培養和保存,還用于肉毒梭菌及兼性厭氧和厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(GB/T 8538-200...
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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