詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
禽副粘病毒通用PCR檢測試劑盒規格 | Avian Paramyxovirus (APMV)RTPCR | BK-P8823 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
L-蛋氨酸(甲氨酸) CAS 63-68-3 * 規格: HPLC≥98%;200mg
酸小檗堿 CAS 633-66-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
野漆樹苷 CAS 17306-46-6 * 規格: HPLC≥98%;20mg
(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D- CAS 1369 * 規格: HPLC≥98%;10mg
蓮心堿高酸鹽 CAS 5088-90-4 * 規格: HPLC≥98%;20mg
毛蕊異黃 CAS 20575-57-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 CAS 578-74-5 * 規格: HPLC≥98%;5mg
荷葉堿 CAS 4 * 規格: HPLC≥98%;20mg
苦玄參苷IB CAS * 規格: HPLC≥98%;20mg
葒草苷 CAS 28608-75-5 * 規格: HPLC≥98%;20mg
酸棗仁皂苷B CAS 55466-05-2 * 規格: HPLC≥98%;20mg
朝藿定A CAS 110623-72-8 * 規格: HPLC≥98%;20mg
厚樸酚 CAS 528-43-8 * 規格: HPLC≥98%;20mg
飛薊賓 CAS 22888-70-6 * 規格: HPLC≥98%;20mg
槲皮素 CAS 117-39-5 * 規格: HPLC≥98%;20mg
禽副粘病毒通用PCR檢測試劑盒規格地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis植物桿菌 Lactobacillus plantarum
蘇云金芽胞桿菌亞毒亞種 Bacillus thuringiensis subsp. subtoxicus根瘤菌 Rhizobium sp.
小鼠支氣管成纖維細胞*培養基大鼠成肌細胞
涎沫假絲酵母 Candida zeylanoides曲霉屬 Aspergillus sp.
香菇 Lentinula edodes地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
4T1(小鼠腺細胞)大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
特異青霉(點青霉) Penicillium notatumNCI-H1299(人非小細胞肺細胞)
苜蓿中華根瘤菌炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius
rEPC,大鼠內皮祖細胞-骨髓費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
屎腸球菌 Enterococcus faeciumKG-1(人急性骨髓性白血病細胞)
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人髂動脈內皮細胞*培養基純白鏈霉菌 Streptomyces candidus
MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞肺腺
檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereus毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
小鼠前脂肪細胞*培養基小鼠胰島細胞*培養基
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