詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒規格 | Burkholderia cepaciaPCR | BK-P8943 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
林 CAS 5250-39-5 * 規格: 100mg
多潘立 CAS * 規格: 100mg
表沒食子兒茶素沒食子酸酯 CAS 989-51-5 * 規格: 20mg
谷氨酸 CAS * 規格: 50mg
對 CAS * 規格: 100mg
甲氧芐啶 CAS * 規格: 100mg
甘草次酸 CAS 1449-05-4 * 規格: 20mg
茵陳(茵陳蒿) CAS * 規格: 1.5g
環丙星 CAS 93107-08-5 * 規格: 100mg
川烏 CAS * 規格: 0.5g
瑞香素 CAS * 規格: 約20mg/支
硝苯地平雜質B CAS * 規格: 30mg
絨毛龍芽草 CAS * 規格: 2g
牛膝 CAS * 規格: 1g
黏質雷氏菌 CAS * 規格: 凍干粉
洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒規格1-溴-4-(*硅) 229.19 1- -4- (three methyl silicone) benzene*:1862439分子量: C9H13BrSi
5-溴-2-氟甲 189.02 5- -2- fluoride*:51437-00-4分子量: C7H6BrF
酪里達唑 333.45 Cheese with Trinidad*:74772-77-3分子量: C18H23NO3S
2-氯-5-甲 252.48 2- chloride -5-*:116632-41-8分子量: C7H6ClI
4-溴-4'-正庚聯 331.29 4- bromo -4'- n-heptanoic biphenyl*:58573-93-6分子量: C19H23Br
6,6'-二溴-2,2'-聯吡 313.98 6,6'- dibromo -2,2'- bipyridine*:49669-22-9分子量: C10H6Br2N2
蘇丹紅197 Tonyred 197 381.44分子量: C23H19N5O*:52372-39-1
二硫鉬 160.07 Molybdenum disulfide*:1317-33-5分子量: MoS2
氯代3,6-二-10-甲吖 259.73 Two amino -10- chloro 3,6- methylacridine*:86-40-8分子量: C14H14ClN3
(S,S)-(-)-2,2'-異亞丙雙(4-叔丁-2-惡唑啉) 294.44 (S, S) - (-) -2,2'- isopropylidenebis (4- tert butyl -2- oxazolinyl)*:131833-93-7分子量: C17H30N2O2
5-甲氧-2-甲并硒唑 226.14 5- methyl group -2- methyl benzene and selenium*:2946-17-0分子量: C9H9NOSe
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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