詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒規格 | Adenoassociated Virus(AAV)PCR | BK-P8763 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
IMR-32(人神經母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2
SuperPolymer Rabbit&Mouse HRP Kit/Super Polymer-二步法IHC試劑盒3ml、18ml國產
桿菌屬 Lactobacillus sp.燼灰鏈霉菌 Streptomyces cinereogriseus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae酸球菌 Lactococcus lactis
亞酸胱氨酸增菌/SC增菌/SC肉湯/Selenite Cystine Broth沙門氏菌選擇性增菌培養250克國產/進口
大鼠肝細胞瘤細胞英文名稱:H-4-II-E
SDS-PAGE Loading Buffer (非還原,5x)10ml國產
日本霉 Rhizopus japonicusII型膠原酶(含100mL酶解緩沖)
鈉蔗糖瓊脂/Sodium Chloride Sucrose Agar副溶血性弧菌的選擇性分離培養250克國產/進口
香菇 Lentinula edodes釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
小鼠前脂肪細胞*培養基100mL
腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒規格氯唑H Black BH 830.71分子量: C32H21N6Na3O11S3*:2429-73-4
4-氯喹唑啉 164.59 4- chloroquine cefazolin*:5190-68-1分子量: C8H5ClN2
2-(3-(4,4,5,5-四甲-l-1,3,2-dioxaborolan-2-)-1--1氫并咪唑 2- (3- (4,4,5,5- four - l-1,3,2-dioxaborolan-2- methyl -1- phenyl) phenyl benzimidazole hydrogen -1*:952514-86-2分子量:
2-甲氧-4-吡甲醛 2-, -4-, formaldehyde*:72716-87-1分子量:
2-氯-5-甲-3-硝吡 172.57 2- -5- -3- nitro pyridine*:23056-40-8分子量: C6H5ClN2O2
分散蘭1 Disperse blue 1 268.27分子量: C14H12N4O2*:2475-45-8
4-羥甲-4'-甲-2,2'-聯吡 200.24 4-, -4'-, -2,2'-*:81998-04-1分子量: C12H12N2O
4-甲-5-甲酰噻唑 127.16 4- -5- benzoyl methyl thiazole*:82294-70-0分子量: C5H5NOS
鄰硝三氟甲 191.11 Ortho nitro three f*:384-22-5分子量: C7H4F3NO2
過氧羥異丙 152.19 Cumene hydroperoxide*:80-15-9分子量: C9H12O2
3-乙酰-2-溴吡 200.03 3- acetyl -2-*:84199-61-1分子量: C7H6BrNO
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