CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

 試劑盒簡介：

CHO 殘留DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 CHO  宿主細胞 DNA。

本試劑盒利用 Taqman 探針法， 定量檢測樣本中 CHO  殘留 DNA。該方法具有速度快、 特異性高、  性能可靠且最di檢測限可達到 fg 級別。

試劑盒組份：

表 1：試劑盒組份

規格 ：100  反應

適用機型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

實驗所需但試劑盒未包含材料：

? 1.5ml 無菌低吸附離心管

? 96 孔 qPCR  板

? 一次性手套

? 1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭

相關設備：

?  離心機

? 渦旋振蕩器

? 熒光定量 PCR 儀

? 1000ul 、100ul 、10ul 移液器

CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)qPCR 程序參數設置(以 ABI 7500 為例)：

1.創建空白新程序，選擇絕對定量檢測模塊。

2.創建新檢測探針，命名為 CHO-DNA，選擇報告熒光基團為 FAM，淬滅基團為 none,檢測 參比熒光為 ROX。

3.設置兩步法反應程序： 50oC 2min, 95oC 預變性 10min；95oC 10 sec，60oC 1min，40 個循環； 反應體積為 30ul。

qPCR 結果分析(以 ABI 7500 為例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 將 Threshold 設置為 0.05 ，點擊 Analyze，此時可 初步查看擴增曲線的形態是否正常。

2.在 Results  的 Plate 面板中，將標準曲線孔的 Task 一欄設置為 Standard，并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03  (含義為每孔的 DNA 量， 單位為 pg)， 并且

在相應的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設置為 NTC，將陰性質控 NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設置為 Unknown，并且在相應的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后點擊開始鍵。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可讀取標準曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2 。

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一欄可讀取無末班對照 NTC、陰性質控 NEG、 待測樣本、樣本 ERC 的檢測值。后續可在檢測報告中將單位換算為 pg/ml  樣本。

注:根據待測樣本和樣本 ERC 的檢測結果計算加樣回收率，加樣回收率要求在 50%- 150%之 間。

1g立枯絲核菌Human Fcγ(Fc Fragment of IgG) ELISA Kit

25g盤長孢狀刺盤孢Human miRNA-210 ELISA Kit

5g紅鬼筆Human anti-SARS-CoV2(N) IgG ELISA Kit

25g伯克霍爾德菌Human ALOX5(Arachidonate Lipoxygenase 5) ELISA Kit

5g環圈鏈霉菌Human Hsd17b13( 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 13) ELISA Kit

1g毒青霉Human SEPTIN7(septin-7) ELISA Kit

5g阿舒假囊酵母Human anti-SARS-CoV2(N) IgM ELISA Kit

1g曲霉屬Human anti-2019 nCoV(S) IgM ELISA Kit

5g解脂假絲酵母Human anti-2019 nCoV(S) IgG ELISA Kit

25MG白布勒擔孢酵母Human OTUD5(OTU domain containing 5) ELISA Kit

25g白靈側耳Human MARK2 ELISA Kit

5g靈芝屬Human MARK3 ELISA Kit

1g黑木耳Human MARK1 ELISA Kit

250mg美澳型核果褐腐病菌Human MARK4 ELISA Kit

100g玉米大斑病菌Human MARS ELISA Kit

25g棕褐小單孢菌Human MARVELD2 ELISA Kit

10mg猴頭Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit

CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

Kovacs氏靛基質試劑人腦微血管內皮細胞  原代上皮細胞特制基礎無血清培養基BSA (bovine serum albumin)  牛血清白蛋白（第五組分）

V-P甲、乙液試劑人腦血管平滑肌細胞  原代內皮細胞特制基礎無血清培養基KLH (keyhole limpet hemocyanin)  血藍蛋白

1%亞碲酸溶液人腦血管外膜成纖維細胞  原代平滑肌細胞特制基礎無血清培養基OVA (ovalbumin)  雞卵白蛋白

亮綠瓊脂人腦血管周細胞  原代成纖維細胞特制基礎無血清培養基THY (thyroglobulin,TG)  甲狀腺球蛋白

平板計數瓊脂（PCA)人脈絡叢內皮細胞  原代心肌細胞特制基礎無血清培養基HSA/human Serum albumin  人血清白蛋白

假單胞分離瓊脂人脈絡叢成纖維細胞  原代系膜細胞特制基礎無血清培養基Streptavidin, SA  鏈霉親和素

假單胞分離肉湯人腦膜細胞  原代肝實質細胞特制基礎無血清培養基Protein G/FITC  FITC標記蛋白-G